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暗视野显微镜是什么原理,具体用在什么领域?

发布时间:2020/4/9

 暗视野显微镜也是生物显微镜的一种延续,通过改变聚光镜的使用和光路的改变使用通过观察试样的观察中散射通过观察光(光束),高对比度超微结构技术观察那个 光学和电子显微镜中使用的一种技术。

在普通光学显微镜(明场照明)的情况下,放置在照明光颜色(灯泡颜色,暖白色等)的明亮背景中的样品会阻挡该光并观察到比背景暗的状态。另一方面,暗视野分光镜从倾斜方向照射,使得光不进入物镜,并观察由样品散射的光。在这种情况下,明亮的样品出现在深色背景上并被观察到。这种照明方法称为暗场照明。

 暗视野显微镜为了通过这种方法进行观察,通常使用带有专用暗场聚光镜的光学显微镜。对于生物显微镜,可以使用便宜的干式聚光镜和油浸式聚光镜来提供更明亮的照明。还有一种使用相差电容器进行暗场观察的技术。通过用学习显微镜或体视显微镜从被检体侧面用闪光灯发出的光来进行暗场观察是可能的。

暗视野显微镜效果通过暗视野显微镜果蝇的胚胎观察的例子。在明亮的视野中可以看到难以观察到的精细结构。

暗场显微镜的**优势在于,它可以轻松,廉价地检查低对比度,超细结构,微病原体和微划痕的样品。此外,由于不需要诸如荧光染色的操作,因此不会发生由于该操作而导致的伪影。


但是,暗场照明方法仅易于观察精细结构,而不能提高分辨率(分辨率)本身。分辨率取决于数值孔径。应该注意的是,暗视野光谱仪仅用具有高数值孔径分量的光进行照明,因此不能使用具有高数值孔径的物镜(小于NA.0.8)。


另外,基本上不能使用具有厚度的样品(在落射照明的情况下,存在使用具有遮光狭缝的物镜,照明镜和暗视野照明机构的方法)。


此外,作为设备的限制,为了获得明亮的图像,需要高亮度照明(尽管不如相衬显微镜那么多)。


暗视野显微镜原理

载玻片上的样品会引起散射(主要是Mie散射),对照明光的衍射和反射。在暗视野照明中,由于照明光被限制在较高的数值孔径分量(圆锥形外周表面结构)中,因此该散射光基本上进入物镜。


暗场聚光镜基本上是普通的显微镜聚光镜,其膜片叶片附着在太阳上,结构简单。因此相对便宜。


在使用可见光的光学显微镜中,根据光的波长,理论上分辨率被限制在大约200 nm。即使不可能在更接近分辨率的两个对象之间进行区分,也可以检测尺寸小于分辨率的对象或检测小于分辨率的运动。由于容易获得高对比度图像的特征,暗场显微镜通常用于检测这种精细结构和精细运动。对于这种先进的暗场观察,不仅使用了暗场聚光器,而且还使用了激光倾斜照明,通过光的全反射在界面处形成的field逝场进行照明,通过锥形透镜进行照明。

作为类似的方法,存在从倾斜方向进行照明的“倾斜照明”。在这种情况下,照明的方向性应被称为暗场照明,并且存在一种装置,该装置在普通的明场聚光器中结合了倾斜照明机构,并且可以通过一次触摸而切换到倾斜照明模式。


如果使用相差显微镜用的聚光镜和数值孔径小的物镜,则可以容易地实现暗场分光镜。


由于用荧光显微镜观察会切出背景光而仅观察到激发光,因此不可避免地要进行暗视场显微镜检查。


在扫描电子显微镜中,选择性检测衍射波并以高对比度观察二次电子的技术称为暗场观察。这是通过调节物镜孔径的位置并顺便用电子束扫描束来完成的。


在X射线摄影中,通过检测X射线的折射来观察高对比度的物体的技术被称为“ X射线暗场法”,并且正在被研究。


一些光学小鼠使用暗视野显微镜。这种类型的鼠标也可以在透明玻璃或光滑表面(例如大理石或漆)上使用。以上就是暗视野的用处,具体不明可以咨询上海谱骞光学仪器有限公司技术部021-57632373

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