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显微镜观察检测细胞

发布时间:2019/12/19

显微镜观察检测细胞

相差显微镜

活细胞对光线是透明的,光线通过活细胞时,波长和振幅几乎没有改变,所以用普通光镜无法看清未经染色的活细胞。20世纪30年代 荷兰 Zernike
原理:利用光的衍射和干涉特性,把透过标本不同区域的光波的光程差转变成振幅差,使细胞内各种结构之间呈现清晰可见的明暗对比,从而使标本的各种结构变得清晰。

相差显微镜观察活细胞的步骤如下(1)调整好相差显微镜(2)观察瓶皿准备(3)调光;4)调节与摄影(5)观查细胞

细胞的生长状态生长良好的细胞,在显微镜下可观察到细胞透明度大,折光性强,轮廓不清。

若细胞生长状态不良,可见细胞轮廓增强,细胞折光性变弱,细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质,细胞之间空隙增大,细胞形态不规则,甚至失去原有细胞的特点,产生圆缩脱落,有时细胞表面及周围出现丝絮状物。


各种细胞及各代细胞增殖的时间不尽相同。
原代细胞、成体组织的潜伏期较长,24h后仅见到部分细胞开始贴壁,912d长满瓶底,细胞融合呈交叉重叠生长。
传代细胞系、胚胎组织或幼体细胞潜伏期短,一般经过悬浮、贴壁伸展很快进入潜伏期、对数生长期,细胞大量繁殖,逐渐相连成片而长满瓶底。

一旦发现细胞长满瓶底80%就应及时传代,否则会影响细胞生长甚至脱落。
悬浮细胞当发现生长显著、密度增大、分布稠密、培养液变黄时也应及时传代。

注意事项
标准化生产的培养板、培养瓶或皿一般成像效果都较好,但反复刷洗过的玻璃或塑料器皿将严重影响分辨力。
准备观察的瓶、皿要平坦,质地均匀,透光度好,在观察前将培养瓶、皿面擦净。
天气较冷时,由于温差使培养瓶内壁形成雾滴而影响观察的清晰度,可轻轻将瓶倾斜使瓶内培养液浸润内壁,以得到好的相差像。
对原代细胞培养进行相差显微照相,应在换液后进行,这样可以去除漂浮的组织块和死细胞,提高成像清晰度。
观察细胞时要有无菌概念,动作要轻,避免猛烈震荡;观察时间不要太长,观察次数也不要太频繁,以免影响细胞生长。


活细胞的观察检测方法

1、暗视野显微镜技术观察活细胞


原理:利用特殊聚光器使光线不能进入物镜,经过标本的散射光线使物镜被放大,因此在黑暗背景中可呈现明亮的像。

优点:反差增大,分辨率提高,可观察到5nm的微小质点。

应用:观察活细胞内的细胞核、线粒体、细菌和霉菌等。

2.缩时显微摄影术观察

优点:可直接记录活细胞的连续动态变化过程,能非常直观地展现细胞生长过程中的动态变化,如细胞运动、细胞分裂、细胞膜变化、细胞死亡等过程。
缺点:较昂贵

3.体外活细胞染色观察

体外活细胞染色就是在体外培养条件下,用某种染料对活细胞进行染色,而不影响活细胞生命活动的一种方法。利用这种方法,可以对培养物进行染色观察,经染色的培养物还可以继续进行培养。

文章出自:上海谱骞光学 转载时必须以链接形式注明作者和原始出处及本声明。


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